蛋白质与双缩脲试剂发生什么反应
养生饮食编辑
医普观察员
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蛋白质与双缩脲试剂反应呈现紫色，这一现象基于肽键与碱性铜离子的络合作用，常用于生物化学检测。反应原理涉及蛋白质肽键在碱性条件下与Cu²⁺形成紫色络合物，颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
1. 反应原理
双缩脲试剂由氢氧化钠、酒石酸钾钠和硫酸铜组成。碱性环境使蛋白质肽键（-CO-NH-）解离，氮原子孤对电子与Cu²⁺配位形成四齿螯合物。该络合物在540nm波长处有最大吸收峰，紫色深浅直接反映肽键数量。反应特异性针对含两个以上肽键的化合物，单氨基酸无此反应。
2. 检测应用
临床生化检验常用该方法测定血清总蛋白，正常参考范围60-80g/L。操作时将试剂与样本按1:20比例混合，37℃孵育10分钟后比色。需注意高脂血症样本可能产生浑浊干扰，此时可选用双缩脲-溴甲酚绿联合检测法。实验室常用牛血清白蛋白作为标准品制作校准曲线。
3. 干扰因素
血红蛋白、胆红素等色素物质可能影响比色结果，需作样本空白对照。铵离子浓度超过10mmol/L会与铜离子竞争结合，导致显色减弱。含EDTA的抗凝血浆会螯合铜离子，应避免使用。某些药物如磺胺类可能产生沉淀，需离心后取上清检测。
4. 方法优化
自动化分析仪采用两点终点法，在546nm和700nm双波长检测消除浊度干扰。微量检测可使用96孔板模式，样本量仅需5μL。为提高灵敏度，可添加表面活性剂如Triton X-100增强显色稳定性。实验室应定期验证试剂线性范围，通常要求r²≥0.995。
该反应是蛋白质定量金标准，具有操作简便、成本低廉的优势。实际应用中需结合样本类型选择合适前处理方法，异常结果应结合电泳或免疫检测复核。维护仪器比色系统的准确性对保证检测质量至关重要。
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